产品货号：
GS0153
中文名称：
miRNA荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
MicroRNAs qPCR Kit(SYBR Green Method)
产品规格：
1mL|2mL
发货周期：
1～3天
产品价格：
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2×miRNA qPCR master mix荧光定量试剂是专门为miRNA荧光定量检测设计，灵敏度更高、重复性更好。本试剂盒采用SYBR Green Ι染料法对microRNA进行荧光定量检测，2×miRNA qPCR master mix预混液包括高效快速的热启动酶和高浓度的SYBR Green Ι染料，反应速度更快、检测灵敏度更高。提供ROX染料可校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，适用于不同型号的荧光定量PCR仪。
保存：-20℃，避光。
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- 快速热启动酶，大大缩短反应时间。
- 高灵敏度的荧光定量试剂更适合miRNA的精确定量。
- 提供不同浓度的ROX参比染料，适用于不同型号的荧光定量PCR仪。
| 组分 | 1mL | 2mL |
| 2×miRNA qPCR master mix | 1mL | 2mL |
| ROX Reference Dye(L) | 100μL | 200μL |
| ROX Reference Dye(H) | 100μL | 200μL |
| RNase-free water | 1mL | 2mL |
保存：-20℃，避光。
- 所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
- 2×miRNA qPCR master mix和ROX Reference Dye保存和使用应避免强光照射。
- 避免反复冻融2×miRNA qPCR master mix，反复冻融可能使产品性能下降。长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
- 反应液配制请在冰上进行。
- 按下表加入各成分配制反应体系：
成分 用量 终浓度 2×miRNA qPCR master mix 10μL 1× Forward Primer，10μM 0.5μL 0.25μM Reverse Primer，10μM 0.5μL 0.25μM Template DNA 1～2μL - ROX Reference Dye(L)/(H) 1μL - RNase-free water 至20μL -
注：- 通常引物浓度以0.25μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1～1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；有引物二聚体时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
- 可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
- ROX Reference Dye请根据使用仪器的机型进行选择
① ROX Reference Dye(H)适合机型如下：
ABI Prism7000/7300/7700/7900,Eppendorf Realplex 4,
ABI Step One,ABI Step One Plus。
② ROX Reference Dye(L)适合机型如下：
ABI Prism7500,ABI Prism7500 Fast,Stratagene Mx3000/Mx3005P,Corbett Rotor Gene 3000。
③ 以下机型无需ROX校正：
Roche LightCycler480,Roche Light Cycler96,MJ
Research Chromo4,Opticon (II),Bio-Rad iCycler iQ,
iQ5,Bio-Rad CFX96,Corbett Rotor Gene 6000,
Eppendorf Realplex 2。
- 通常引物浓度以0.25μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1～1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；有引物二聚体时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
- 设置反应程序：
步骤 温度 时间 循环数 预变性 95℃ 30 s 1 变性 95℃ 5 s 40 退火/延伸 60℃ 30 s 融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。 - 对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1分钟，以使起始模板充分解链。
- 建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以56℃～64℃的范围作为设定参考。
- 获得的cDNA反应液可直接作为模板进行荧光定量检测。
- 对GC含量高、二级结构复杂的模板，可将预变性时间延长至1分钟，以使起始模板充分解链。
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